叶绿体膜的2-氧戊二酸/苹果酸转运体:一个含有12螺旋基序的转运体的分子克隆和功能蛋白在酵母细胞中的表达

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作者：scidown 发布时间：2022-04-07 10:39:20 文章标题：

叶绿体膜的2-氧戊二酸/苹果酸转运体:一个含有12螺旋基序的转运体的分子克隆和功能蛋白在酵母细胞中的表达( The 2-oxoglutarate/malate translocator of chloroplast envelope membranes: molecular cloning of a transporter containing a 12-helix motif and expression of the functional protein in yeast cells )

文章作者：

A Weber E Menzlaff B Arbinger M Gutensohn C Eckerskorn UI Fluegge Chloroplasts Intracellular Membranes Schizosaccharomyces Ketoglutaric Acids Malates DNA, Plant Amino Acids Plant Proteins Cloning, Molecular Base Sequence

文章简述：

菠菜叶绿体的2-氧戊二酸/苹果酸转运子将碳骨架转运到叶绿体中进行净谷氨酸合成。从纯化的蛋白质中获得的内切蛋白酶Lys-C肽序列允许设计寡核苷酸，然后用于cDNA文库的杂交筛选。其中1个克隆的插入片段为1945 bp,编码前体蛋白的569个氨基酸残基，分子量为60288Da。与牛心脏线粒体2-氧戊二酸/苹果酸载体或其他已知蛋白没有显著的同源性。该转运蛋白由一个亲水性N端区（转运肽）组成，其长度约为90-100个氨基酸残基，与其它已知的被膜蛋白相比，具有高等植物叶绿体转运序列的典型特征。成熟蛋白含有12个α-螺旋构象的跨膜片段。与其它已知的细胞器来源转运体不同，这些转运体都是具有6+6螺旋折叠模式的同源二聚体，它可能以单体的形式起作用。体外合成的前体蛋白定向于叶绿体，在那里它以抗蛋白酶的方式插入叶绿体被膜。将编码前体蛋白的cDNA克隆到酵母表达载体pEVP11中，并将其用于重组裂殖酵母粟酒裂殖酵母的细胞转化。2-氧戊二酸/苹果酸转位体可在转化酵母细胞中功能表达，重组蛋白具有与原叶绿体蛋白相同的底物特异性。

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