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用微制造荧光激活细胞分选和酪胺信号放大荧光原位杂交对单个细菌细胞的特异性分选。( Specific sorting of single bacterial cells with microfabricated fluorescence-activated cell sorting and tyramide signal amplification fluorescence in situ hybridization. )
CH Chen SH Cho HI Chiang F Tsai K Zhang YH Lo TLC Cypermethrin Copper acetate o-Tolidine
当研究人员试图探索逃避细胞培养的不同细菌群落的基因组成时,面临两个主要挑战:从微生物样本中分离罕见细菌和去除污染细胞的脱氧核糖核酸。我们报告了一种紧凑、低成本、高性能的微型荧光激活细胞分选(μFACS)技术与酪胺信号放大荧光原位杂交(TSA-FISH)相结合来解决这两个挑战。适用于流式细胞术的TSA-FISH方案比标准FISH方法的荧光强度提高了10-30倍。μFACS技术对TSA-FISH标记的大肠杆菌细胞的富集能力提高了223倍,通过信号处理,灵敏度提高了18dB。用μFACS技术去除污染的无细胞DNA。经过两轮对混合λ-噬菌体DNA(10ng/μL)的大肠杆菌的分选,我们发现λ-DNA浓度降低了10万倍以上。μFACS和TSA-FISH技术的集成为细菌基因组复杂性的研究以及其他样品类型的单细胞基因组分析提供了一种高效、低成本的解决方案。
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