针对类风湿性关节基质钙网蛋白的滑膜B细胞来源重组单克隆抗体的鉴定( Characterization of a Synovial B Cell-Derived Recombinant Monoclonal Antibody Targeting Stromal Calreticulin in the Rheumatoid Joints )

Elisa,Corsiero Lucas,Jagemann Mauro,Perretti Costantino,Pitzalis Michele,Bombardieri

类风湿关节炎(RA)的特征是滑膜异位淋巴样结构(ELS)的形成支持B细胞对局部产生的瓜氨酸抗原(cit)的自反应性，包括中性粒细胞胞外陷阱（NETs）中所含的抗原。然而，从ELS+RA组织中分离的B细胞中只有少数RA-rmAbs对NETs有反应。因此，由局部分化的B细胞靶向的其他潜在自身抗原的替代细胞来源仍未明确。RA成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)参与了RA相关自身抗原的释放。在本研究中，我们的目的是定义来自RA-RMABs靶向的RA-FLS的基质源性自身抗原。用活细胞免疫荧光法(IF)对71个RA-rmAbs进行抗RA-FLS筛选。Western blotting用于从RA-FLS蛋白提取物中鉴定潜在的自身抗原。通过共定位免疫荧光共聚焦显微镜、ELISA、免疫沉淀试验和表面等离子体共振对未修饰/CIT蛋白进行验证。检测抗瓜氨酸肽/蛋白Abs(ACPA)+与ACPA-RA患者的血清免疫反应性。71个RA-rmAbs中有10个对RA-FLS有明显的免疫荧光反应，但与NETs没有结合。质谱和Western blotting鉴定为钙网蛋白（calreticulin,CRT）的一条58kDa条带为基质反应型RA-rmAb(RA057/11.89.1)。共聚焦显微镜显示在RA-FLS中抗CRT RA057/11.89.1之间有明显的细胞共定位。RA057/11.89.1能免疫沉淀RCRT。将CRT脱亚胺为cit-CRT可显著提高RA057/11.89.1免疫反应性。在竞争性结合试验中，cit-CRT显示出比未修饰CRT更大的阻断能力。最后，抗CIT-CRT Abs在ACPA-RA血清中比在ACPA-RA血清中更易检出。我们发现了一种在ELS+RA滑膜中局部分化的滑膜B细胞来源的RA-rmAb对CRT的反应，这是一种最近在RA患者中描述的新的自身抗原，提示FLS来源的CRT可能有助于促进局部自身免疫反应。

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