胡椒碱抑制内皮细胞向成纤维细胞转化

李亚彭 高路 史慧婷 冯胜东 田欣雨 孔令尧 张彦周 内皮细胞；成纤维细胞；胡椒碱；心肌纤维化

目的探讨胡椒碱在内皮细胞向成纤维细胞转化中的作用.方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC);取第4~6代细胞用于实验.采用转化生长因子β(TGF-β)诱导内皮细胞向成纤维细胞转化模型.将HUVEC分为6组;即对照组,TGF-β组,TGF-β+1μmol/L胡椒碱组,TGF-β+5μmol/L胡椒碱组,TGF-β+10μmol/L胡椒碱组和TGF-β+20μmol/L胡椒碱组.采用CKK-8试剂盒检测细胞增殖率.采用CD31/波形蛋白(vimentin)荧光染色检测2种蛋白的表达水平.采用血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)/α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色检测2种蛋白的表达水平.采用实时定量PCR法检测内皮向间质细胞转化标志物的转录水平.Westernblot法检测snail和twist的蛋白表达水平.结果(1)胡椒碱对TGF-β诱导的细胞增殖率的影响:TGF-β组细胞增殖率明显高于对照组(P<0.05);TGF-β+1μmol/L胡椒碱组和TGF-β+5μmol/L胡椒碱组细胞增殖率与TGF-β组比较差异均无统计意义(P均>0.05);TGF-β+10μmol/L胡椒碱组和TGF-β+20μmol/L胡椒碱组细胞增殖率则明显低于TGF-β组(P均<0.05).(2)胡椒碱对TGF-β诱导的CD31/vimentin表达的影响:TGF-β组细胞CD31的表达水平明显低于对照组(P<0.05);而vimentin的表达水平则明显高于对照组(P<0.05).TGF-β+10μmol/L胡椒碱组和TGF-β+20μmol/L胡椒碱组细胞CD31的表达水平则均明显高于TGF-β组(P均<0.05);而vimentin的表达水平则均明显低于TGF-β组(P均<0.05).(3)胡椒碱对TGF-β诱导的VE-cadherin/α-SMA表达的影响:TGF-β组细胞VE-cadherin的表达水平明显低于对照组(P<0.05);而α-SMA的表达水平则明显高于对照组(P<0.05).TGF-β+10μmol/L胡椒碱组和TGF-β+20μmol/L胡椒碱组细胞的VE-cadherin表达水平则明显高于TGF-β组(P<0.05);而α-SMA的表达水平则明显低于TGF-β组(P<0.05).(4)胡椒碱对胶原蛋白转录的影响:TGF-β组细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA表达水平均明显高于对照组(P均<0.05);而TGF-β+10μmol/L胡椒碱组和T

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