嗜热菌GH3 β-葡萄糖苷酶的克隆、表达及特性研究

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作者：scidown 发布时间：2021-08-17 23:07:05 文章标题：

嗜热菌GH3 β-葡萄糖苷酶的克隆、表达及特性研究( Cloning, expression and characterization of an ethanol tolerant GH3 β-glucosidase from Myceliophthora thermophila )

文章作者：

A Karnaouri E Topakas T Paschos I Taouki P Christakopoulos Glycoside hydrolase family 3 Myceliophthora thermophila Pichia pastoris Overexpression β-glucosidase Transglycosylation Ethanol tolerance Thermophilic

文章简述：

克隆了嗜热菌丝体β-葡萄糖苷酶基因bgl3a,并在毕赤酵母中表达。成熟的β-葡萄糖苷酶基因是切除一个内含子和分泌信号肽后产生的，被置于质粒pPICZαc中的强酒精氧化酶启动子(AOX1)的控制下。对重组酶(90kDa)进行了纯化和鉴定，以评价其生物技术潜力。在甲醇诱导下，重组P.pastoris高效地向培养基中分泌β-葡萄糖苷酶，并在192h后产生较高的酶活力(41U/ml)。MtBgl3a能够水解低分子量底物和含有β-糖苷残基的多糖。p-β-NPG和纤维二糖的Km分别为0.39mM和2.64mM。p-β-NPG水解的最适pH值为5.0°，最适温度为70°C。β-葡萄糖苷酶在60℃下的半衰期为143min。测定了D-葡萄糖、D-木糖和D-葡萄糖酸的抑制动力学参数，表明该酶对这些糖和氧化产物具有耐受性。该重组酶在短链醇刺激下，由于其转糖基化活性，在甲醇存在下可以有效地合成甲基-D-葡萄糖苷。MtBgl3a在乙醇中的稳定性较好，在50%乙醇中作用6h后，其活性基本保持不变。该酶具有较高的催化性能、良好的热稳定性和对高浓度乙醇、D-木糖和D-葡萄糖的耐受性，适合于木质纤维素生物质的水解生产生物燃料，是一种高效、完整的多酶鸡尾酒的一部分。

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