星形胶质细胞中腺苷ENT1转运体的鉴定及腺苷A1受体对其的调控( Identification of Adenosine ENT1 Transporters in Astrocytes and their Modulation by Adenosine A1 Receptors )

R Cunha M Matos A Rodrigues P De-Carvalho P Agostinho

腺苷是中枢神经系统中重要的神经调节剂。腺苷主要通过对抑制性A1受体和促进性A2A受体的突触作用来控制神经元活动，尽管它也被提出来控制胶质功能（Fredholm et al.，2005，Int Rev Neurobiol63:191-270)。细胞外腺苷水平受到严格控制：腺苷在细胞外积累是神经元活动的一个功能，腺苷转运体在快速清除这种细胞外腺苷方面起着关键作用；这主要是通过平衡核苷转运体(ENT1和ENT2)发生的，它们位于神经元和星形胶质细胞中。利用原代培养的脑星形胶质细胞，我们现在旨在确定ENT1和ENT2在清除细胞外腺苷方面的相对贡献。取生后4～5天Wistar大鼠大脑皮层制备星形细胞培养物，培养3周。星形胶质细胞摄取3H-腺苷15～300秒呈线性关系。由于NBTI（硝基苄基硫代肌苷）是ENT1的选择性拮抗剂，我们用该化合物定义了ENT1和ENT2对3H-腺苷摄取的相对贡献。我们观察到ENT1通过平衡核苷转运体吸收3H-腺苷总量的68.75±8.04%(n=3)。Western blot分析证实在培养的星形胶质细胞中存在ENT1,3H-NBTI呈饱和结合，其KD为2.4±0.6nM(95%可信区间为1.3-3.6nM，n=3),Bmax为18.2±1.3fmol/mg蛋白(n=3)。由于我们以前已经表明腺苷受体控制腺苷的摄取（Pinto-Duarte et al.，2005，J Neurochem 93:595-604)，我们接下来开始研究腺苷受体的激活是否改变了星形胶质细胞对腺苷的摄取。CPA(100nM)激活A1受体可使3H-腺苷摄取量减少22.5±6.9%(n=3,P<0.05),使3H-NBTI结合KD增加75～107%,但对Bmax无明显影响(n=2)。上述结果表明ENT1是星形胶质细胞中主要的腺苷转运体，表明腺苷A1受体的激活可能控制着星形胶质细胞清除腺苷的速度。CNPq和FCT支持

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