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基因特异性突变使酶在体内快速连续进化( Gene-specific mutagenesis enables rapid continuous evolution of enzymes in vivo )
P Hyojin K Seokhee
为了促进蛋白质在细胞中快速、高效地连续进化，已经发展了多种体内诱变方法。然而，它们要么修改与目标基因不匹配的DNA区域，要么遭受低突变率。在此，我们报道了一个突变体eMutaT7(enhanced MutaT7)，该突变体在大肠杆菌中具有非常快的体内突变率和高度的基因特异性。eMutaT7是一种融合到正交RNA聚合酶上的胞苷脱氨酶，每天每1kb可引入多达4个突变，与典型的体外诱变诱导蛋白质定向进化的速率相当，可促进抗生素耐药性和变构激活模型蛋白的快速连续进化。eMutaT7为蛋白质的连续定向进化提供了一种非常简单和可调的方法，并提示将新的DNA修饰酶与正交RNA聚合酶融合是探索扩展的序列空间而不损害基因特异性的有前途的策略。
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