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牛乳和人乳中乳前处理、外泌体分离和RNA提取方法的比较( Comparison of methods for milk pre-processing, exosome isolation, and RNA extraction in bovine and human milk )
S Wijenayake S Eisha Z Tawhidi MA Pitino PO Mcgowan
牛奶是一种高度复杂、异质的生物液体，含有生物活性、膜结合的胞外囊泡，称为外泌体。由于目前在牛奶预处理、外泌体分离和RNA提取方面缺乏标准化的方法，因此乳源外泌体(MDEs)的鉴定具有挑战性。在本研究中，我们测试了：1）三种预处理方法去除牛乳中的奶油、脂肪和酪蛋白，以确定全脂乳在长期储存前的预处理是否能提高MDE的分离；2）两种常用的外泌体分离方法；3）四种从牛和人乳中获得高质量MDE RNA的提取方案。通过透射电镜(TEM)和纳米粒子跟踪分析(NTA)对MDEs进行了表征。我们还提出了一种优化的TEM样品制备方法和MDEs总可溶性蛋白的分离方法。结果表明：（1）牛乳贮藏前的预处理不影响最终外泌体的产量和纯度；（2）外速沉淀法比超速离心法更适合于牛和人乳MDE的分离；（3）TRIzol LS法在牛乳中的RNA产量最高，而TRIzol LS、TRIzol LS+RNA清洁浓缩法和TRIzol LS+RNA清洁浓缩法适用于人乳。
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