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技术提示:用于牛奶样品中金黄色葡萄球菌目视检测的闭管等温多重自匹配起始扩增试验的发展( Technical note: Development of a closed-tube isothermal multiple self-matching-initiated amplification assay for visual detection of Staphylococcus aureus in milk samples )
X Chen H Wang C Liu Y Qi W Guo
金黄色葡萄球菌是奶牛最常见的乳腺炎致病菌之一。它与动物的生产性能下降和世界范围内乳制品业的巨大财政损失有关。一种准确、灵敏的葡萄球菌早期诊断和鉴定方法。牛奶样本中的金黄色是必不可少的。本研究旨在建立一种可视化证实葡萄球菌存在的闭管等温多重自匹配启动扩增(IMSA)技术。靶向nuc保守序列基因的金黄色葡萄球菌。该特异性引物在63°C反应温度下,利用反应体系的最佳组分,在45 min内成功扩增出目的序列。阳性扩增子与显色底物SYBR green I混合后,在紫外光下呈现明亮的绿色荧光,阴性样品保持橙色。我们在所有葡萄球菌的IMSA扩增子中观察到荧光和梯形图案。金黄色葡萄球菌株,非葡萄球菌株无明显变化。金黄色菌株。与环介导的等温扩增法相比,IMSA法具有很高的特异性:它证实了所有7个STAPH的存在。12株非葡萄球菌均未检出假阳性。金黄色菌株。IMSA法的检测下限为1×10CFU/ml,比LAMP法灵敏度高10倍。我们还成功地应用IMSA检测来证实葡萄球菌的存在。乳腺炎奶牛乳样中金黄色葡萄球菌的检测结果与LAMP和real-time PCR检测结果一致。本研究报告使用IMSA来确认葡萄球菌的存在。为葡萄球菌的快速初筛提供了一种潜在的有用方法。金黄色。
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