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食品级蛋白质生产的先进策略:一种新的大肠杆菌/乳酸菌穿梭载体用于改进克隆和食品级表达( Advanced Strategies for Food-Grade Protein Production: A New E. coli/Lactic Acid Bacteria Shuttle Vector for Improved Cloning and Food-Grade Expression )
M Tagliavia A Nicosia lactic acid bacteria (LAB), generally recognized as safe (GRAS) microorganisms, food-grade expression vectors, shuttle expression vectors, advanced food-grade cloning: flippase (FLP) recombinase, resistance cassette removal
在革兰氏阳性菌中，特别是在实验室中（如乳球菌、乳杆菌和链球菌）生产重组蛋白，在重组酶生产、工业食品发酵、基因和代谢工程以及口服疫苗抗原传递等领域具有重要意义。食品级表达依赖于通常被认为是安全有机体的宿主和不依赖抗生素标记的克隆选择，这限制了整个DNA操作工作流程，因为它只能在表达宿主中进行，而不能在大肠杆菌中进行。而且，许多商业化表达载体缺乏用于蛋白质纯化的有用元件。我们构建了一个含有可移除的选择性标记的“穿梭”载体，该载体允许在大肠杆菌中进行可行的克隆步骤和随后的蛋白质在实验室中表达。事实上，从选择的重组质粒中可以很容易地切除盒，并将得到的无标记载体转化到最终的实验室宿主中。进一步的有用元素，如改进的MCS，6XHIS-TAG和凝血酶裂解位点序列被引入。所得到的载体易于在大肠杆菌中克隆，可以快速转化为食品级表达载体，并为改进重组蛋白纯化提供了额外的元件。总的来说，这些特性使新载体成为食品级表达的改进工具。
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