端粒限制性片段(TRF)分析。( Telomere Restriction Fragment (TRF) Analysis. )

I Mender JW Shay Telomere Restriction Fragment 端粒限制性片段 Telomeres 端粒酶 Telomere length 端粒长度

虽然端粒酶在约90%的人类原发肿瘤中表达，但除瞬时增殖的干细胞外，大多数体细胞组织细胞不具有可检测的端粒酶活性（Shay and Wright，1996；Shay and Wright，2001)。在正常细胞中，包括增殖的干细胞样细胞，端粒随着每次细胞分裂而逐渐缩短，这是由于末端复制（链合成滞后）问题和其他原因如氧化损伤，因此所有体细胞都有有限的细胞增殖能力（Hayflick极限）（Hayflick and Moorhead，1961；Olovnikov，1973)。进行性端粒缩短最终导致正常细胞的生长停滞，这就是已知的复制性衰老（Shay等，1991)。一旦端粒酶在癌细胞中被激活，端粒长度就通过在染色体末端添加TTAGGG重复而稳定下来，从而使细胞分裂无限延续（Shay and Wright，1996；Shay and Wright，2001)。因此，衰老和癌症之间的联系可以部分地用端粒生物学来解释。端粒生物学研究有多种快速、方便的方法,如端粒限制性片段(TRF)、端粒重复序列扩增技术(TRAP)（Mender and Shay,2015b)和端粒功能障碍诱导灶(TIF)分析（Mender and Shay,2015a)。在这份协议文件中，我们描述了端粒限制性片段(TRF)分析来确定细胞的平均端粒长度。端粒长度可以通过一种称为端粒限制性片段分析(TRF)的技术间接测量。这种技术是一种改良的Southern印迹，它利用末端限制性片段的长度分布来测量细胞群体中端粒长度的异质性范围（Harley等，1990；Ouellette等，2000)。此法可用于真核细胞。下面的描述集中于人类癌细胞端粒长度的测量。该方法的原理依赖于TTAGGG串联端粒重复序列内缺乏限制性内切酶识别位点，因此用6碱基限制性内切酶的组合消化基因组DNA，而不是端粒DNA，将基因组DNA大小减少到800 bp以下。

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