目的:食管鳞状细胞癌(Esophageal Squamous-Cell Carcinoma,ESCC),癌组织中N-α乙酰基转移酶(Naa10P)表达水平较癌旁组织中明显升高,食管癌严重威胁着健康,我国食管恶性肿瘤病理分型以鳞状细胞癌较为多见.患者预后极差,其5年生存率较低,且患者常常存在化疗耐药情况.目前尚无有效的靶向药物抑制食管癌细胞的生长,参与调控食管癌细胞增殖周期的具体机制尚不清楚.因Naa10P在食管癌组织中高表达,本研究通过体外培养食管鳞状细胞癌ECA109细胞系的基础上,探讨Naa10P表达对食管鳞状细胞癌的细胞周期及其对药物敏感性的影响,阐述Naa10P通过β-Catenin信号通路调控其细胞周期,确定Naa10P表达在食管鳞癌细胞对化疗药物顺铂(DDP)敏感性的影响,在治疗食管鳞状细胞癌,增加化疗药物敏感性方面提供新的思路.方法:1.利用小干扰RNA(siRNA)构建Naa10p低表达的人食管鳞癌ECA109细胞系,实验分为ECA109-siRNA-Naa10组,ECA109-siRNA-NC组,ECA109-空白组.2.通过荧光显微镜,qrt-PCR及蛋白质印迹法鉴定siRNA对细胞的干扰效率.3.流式细胞仪检测细胞周期,CCK-8法绘制生长曲线,蛋白质印迹法鉴定β-Catenin信号通路中β-Catenin,乙酰化β-Catenin(Acetyl-β-Catenin),Cyclin D1,C-Myc的蛋白表达水平.4.使用CCK-8法检测各组细胞经不同DDP浓度处理后对DDP的敏感性.结果:1.siRNA转染及转染效率设置不同Lip2000与siRNA浓度比例,荧光显微镜观察,每孔(六孔板)给予浓度比为10u L:10u L时为最佳转染比例.经qrt-PCR及蛋白质印迹法鉴定转染成功,差异具有统计学意义(P0.01).2.蛋白质印迹法鉴定β-Catenin信号通路中关键蛋白表达水平ECA109-siRNA-Naa10组,ECA109-siRNA-NC组,ECA109-空白组的β-Catenin表达水平无差异(P0.05),ECA109-siRNA-Naa10组的乙酰化β-Catenin,Cyclin D1,C-Myc表达水平显著低于ECA109-siRNA-NC组,ECA109-空白组,差异具有统计学意义(P0.05).3.流式细胞仪检测细胞周期流式细胞仪检测细胞周期中G0/G1期显示:ECA109-siRNA-Naa10实验组(64.833±5.685),ECA109-siRNA-NC对照组(56.833±1.793),ECA109-空白组(54.700±4.762).ECA109-siRNA-Naa10实验组的G0/G1期细胞占比相比于其余两组明显增多,差异具有统计学意义(P0.05).4.CCK-8法绘制细胞生长曲线ECA109-siRNA-Naa10组细胞周期生长曲线较ECA109-siRNA-NC组,ECA109-空白组缓慢(P0.01),即细胞增殖性降低.5.使用CCK-8法检测各组细胞经不同DDP浓度处理后对DDP的敏感性.ECA109-siRNA-Naa10组,ECA109-siRNA-NC组与ECA109-空白组对DDP的半数抑制浓度(IC50)分别为:(12.776±0.739)μg/m L,(19.223±0.276)μg/m L,(18.526±0.568)μg/m L,差异具有统计学意义(P0.01).结论:1.通过降低Naa10p表达,β-catenin信号通路中乙酰化β-catenin,靶基因Cyclin D1,C-Myc的表达水平显著降低,食管鳞癌细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞增殖性明显减慢.2.通过降低Naa10p表达,食管鳞癌细胞系的IC50值明显降低,可增加ECA109细胞对DDP的敏感性.
