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用等温滴定量热法和质谱法测定二环霉素结合和化学计量学的方法( Development of a technique to determine bicyclomycin-rho binding and stoichiometry by isothermal titration calorimetry and mass spectrometry )
Andrew P,Brogan William R,Widger Dalila,Bensadek Isabel,Riba-Garcia Simon J,Gaskell Harold,Kohn
双环霉素（1）是转录终止因子Rho的唯一天然产物抑制剂。Rho是一种利用ATP水解终止新生RNA转录的六聚解旋酶，是许多细菌必需的蛋白质。有关1-Rho相互作用信息的缺乏源于1的弱结合亲和力。本文报道了一种利用rho形成亚胺来增强双环霉素类似物亲和力的新技术，并用等温滴定量热法(ITC)和质谱法(MS)测定了结合化学计量。我们设计的双环霉素配体5a-(3-甲酰基-苯基硫基）-二氢双环霉素（2）（表观I(50)=4μm)比1(I(50)=60μm)更有效地抑制rho。MS表明2在Rho中选择性地与K181形成亚胺。我们发现，尽管rho六聚体上的ATP结合不均匀（三紧三弱），但附近的双环霉素结合口袋不受影响，1和2与所有6个亚基都有相同的亲和力。
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