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利用CRISPR-Cas9核糖核蛋白同时靶向矮牵牛原生质体中复制的基因进行花色修饰( Simultaneous targeting of duplicated genes in Petunia protoplasts for flower color modification via CRISPR-Cas9 ribonucleoproteins )
Yu, Jihyeon Tu, Luhua Subburaj, Saminathan Bae, Sangsu Lee, Geung-Joo
通过Cas9-核糖核蛋白传递，获得了一个F3H基因均发生突变的矮牵牛突变系，其花色为淡紫色粉红色。CRISPR-Cas系统现在正通过允许研究人员在植物中随意产生各种期望的突变来彻底改变农业。特别是，通过Cas9-核糖核蛋白（RNPs）传递的无DNA基因组编辑在植物中有许多优势；不需要密码子优化或在植物细胞中表达的特异性启动子；此外，它可以绕过一些国家的转基因法规。在这里，我们在矮牵牛中进行了位点特异性诱变，以工程花色修饰。我们确定了矮牵牛商品品种‘疯狂午夜’有两个F3H编码基因，并设计了一个同时靶向两个F3H基因的引导RNA。从Cas9-RNP转染原生质体再生的67株T0植株中，我们获得了7个F3HA或F3HB基因突变的突变系和1个F3H基因突变的完整突变系，没有任何选择标记。值得注意的是，只有f3ha和f3hb表现出明显修饰的淡紫色粉红色花色(RHS69d)，而包括单拷贝基因敲除植株在内的其他植株表现出与野生型矮牵牛相似的紫紫色(RHS93a)花色。据我们所知，我们首次用无DNA CRISPR方法展示了观赏作物工程的先例，这将大大加快从实验室到农民田间的过渡。
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