活化Kupffer细胞中METTL3/METTL14的激活和m6a依赖性TGF-β1的翻译( METTL3/METTL14 transactivation and m 6 A-dependent TGF-β1 translation in activated Kupffer cells )

Y Feng H Dong B Sun Y Hu Y Yang Y Jia L Jia X Zhong R Zhao

背景与目的活化枯否细胞(KC)分泌的转化生长因子β1(TGF-β1)促进非酒精性脂肪性肝炎(NASH)向肝纤维化的发展。N6-甲基腺苷(mA)RNA修饰参与了多种细胞应激反应，但是否参与活化KC中TGF-β1的上调尚不清楚。方法采用Western blot、Dot blot和LC-MS/MS检测mA甲基转移酶、METTL3和METTL14的表达，并对mA进行整体修饰。利用RNA-seq和mA-seq筛选差异表达基因和反应性mA峰。用ChIP-PCR和双荧光素酶报告系统验证了NF-κB介导的Mettl3/METTL14反式激活，并在Mettl3/METTL14缺陷KC和髓系细胞特异性METTL14基因敲除小鼠中进一步验证了mA在TGF-β1上调中的作用。结果高脂饮食诱导的NASH大鼠血清脂多糖(LPS)浓度升高。在NASH大鼠肝脏和LPS激活的KC中，TGF-β1的上调与Mettl3/Mettl14的上调和整体mA的高甲基化密切相关。在TGF-β1 mRNA的5 UTR上发现了LPS反应的mA峰。NF-κB直接反式激活METTL3和METTL14基因。在Mettl3/METTL14缺陷KC和髓系细胞特异性METTL14基因敲除小鼠中，LPS刺激的TGF-β1表达被消除。TGF-β1 mRNA 5 UTR上mA位点突变阻断LPS诱导的荧光素酶报告活性升高。结论NF-κB作为转录因子，在LPS胁迫下转激活Mettl3/Mettl14基因，导致RNA mA高度甲基化。TGF-β1mRNA 5 UTR上mA的增加导致了mA依赖性的TGF-β1mRNA的翻译，且与CAP无关。我们发现了mA修饰在TGF-β1上调中的新作用，这有助于阐明NASH进展的分子机制。

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