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单细胞质谱法测定环肽细胞膜通透性( Quantitation of Cell Membrane Permeability of Cyclic Peptides by Single-Cell Cytoplasm Mass Spectrometry )
T Kawai Y Mihara M Morita M Ohkubo TM Watanabe
环肽（CPs）由于具有小分子的细胞渗透性和类似于抗体的特异性亲和力，作为下一代药物受到了广泛的关注。由于细胞内分子是CPs的重要靶点，因此定量研究CPs的细胞内滞留和跨膜通透性对于药物开发具有重要意义。然而，细胞内渗透的CPs不能直接通过使用人工膜和细胞单层膜等方法的常规渗透性分析来评估。在此，我们提出了一种新的单细胞细胞质质谱（SCC-MS）方法。细胞与CPs孵育后，用微针直接从单个细胞中收集细胞质，然后用纳米电喷雾质谱检测CPs。根据时间绘制CP峰的高度，并用一个简单的函数y=a(1-e-bx)来计算流入和流出方向的表观渗透系数(Papp)。选择MCF-7细胞作为模型癌细胞，用环孢素A(CsA)及其去甲基类似物(dmCsA-1、-2、-3)作为模型CPS培养。50μm CPs孵育的细胞内流Papp值为0.017～0.121，外排Papp值为0.20～1.48。较高的外排率可能是外排转运体如CsA的受体P-糖蛋白所致。CPs在细胞内的平衡浓度为4.1-6.8μm，与高外排率有很好的一致性。SCC-MS是新一代以CP为基础的药物的一种可靠的渗透性分析方法。
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