髓系细胞触发受体1增强肠道抗结核感染免疫的机制研究

劳娟凤 龚四堂 吴敏昊 吴永坚 髓系细胞触发受体1 肠结核 组织原位记忆T细胞

目的探讨髓系细胞触发受体1(TREM-1)在肠结核疾病中的作用及分子机制.方法收集2018年12月广州市妇女儿童医疗中心的5名健康人和7例克罗恩病,7例肠结核患者肠组织活检样本,苏木素伊红(HE)染色观察组织形态,Real-time PCR,免疫荧光和流式细胞术方法检测TREM-1在组织和分离的组织原位记忆CD8^(+)T细胞(CD8^(+)T_(RM))的表达.腹腔注射结核菌H37Rv构建10只肠结核幼鼠模型,采用中和抗体阻断TREM-1信号,流式表面染色检测肠道CD4^(+)T细胞,CD8^(+)T细胞,CD19^(+)B细胞,CD11c+树突状细胞,F4/80^(+)巨噬细胞和Gr-1+粒细胞的比例.取肠组织分离单个核细胞,佛波脂和离子酶素刺激6 h,流式胞内染色检测CD8^(+)T细胞干扰素-γ(IFN-γ)水平以及β-catenin表达.取肠和脾脏研磨裂解,细菌平板克隆形成实验检测肠道和脾脏荷菌量.肠组织石蜡包埋切片,HE染色观察肠道病理改变.结果与正常对照和克罗恩患者肠组织相比,肠结核患者肠组织具有明显的结核肉芽肿形成和免疫细胞浸润.Real-time PCR结果显示肠结核组TREM-1 mRNA水平表达升高,与正常对照组和克罗恩病组相比,差异有统计学意义(P<0.05).免疫荧光结果发现肠结核患者组织中TREM-1阳性细胞明显多于正常对照组.进一步流式分析发现TREM-1+CD8^(+)T细胞表现为CD69和CD103高表达,即TREM-1+CD8^(+)T细胞主要为CD8^(+)TRM细胞.阻断TREM-1信号可减少肠结核模型小鼠肠道CD8^(+)T细胞比例,但不影响CD4^(+)T细胞,B细胞,树突状细胞,巨噬细胞和Gr-1+粒细胞的比例.阻断TREM-1信号可抑制肠道CD8^(+)T细胞分泌IFN-γ,以及表达胞内连环蛋白β-catenin,与IgG对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).阻断TREM-1信号可增加肠道和脾脏荷菌量,并且肠道病理损伤加重,表现为肠绒毛结构破坏和炎性细胞浸润.结论结核感染后肠道CD8^(+)TRM细胞TREM-1表达升高,TREM-1受体信号激活β-catenin通路,促进CD8^(+)TRM细胞活化,从而起到清除细菌和改善肠道病理损伤的作用,有望成为治疗肠结核的新靶点.

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