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单标记和双标记RNA的RNA连接( RNA Ligation for Mono and Dually Labeled RNAs )
A Depaix A Mlynarska-Cieslak M Warminski PJ Sikorski J Kowalska
标记RNA是研究RNA功能和定位的重要探针。然而，mRNA标记仍然具有挑战性。在此，我们发展了一种改进的3 ∞nd标记体外转录RNA的方法。我们合成了新的3 ,5 -二磷酸腺苷类似物，在腺苷的N6或C2位置上用叠氮连接剂、荧光标记或生物素修饰，并用T4连接酶或酶后菌株ROMOTED炔烃酰化环加成(SPAAC)将其作为RNA标记的底物。所有类似物都是T4 RNA连接酶的底物。含有大量荧光标记或生物素的类似物显示出比酶后SPAAC更好的总体标记产量。我们成功地标记了未封顶的RNAs、NAD修饰的RNAs和5 -荧光标记的M7 gp3 A m修饰的mRNAs。获得的高度同源的双重标记mRNA具有翻译活性，并使基于荧光的depaping监测成为可能。该方法将有利于各种功能化mRNA为基础的探针的使用。
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