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淋病奈瑟菌耐药相关基因的多重PCR和纳米孔测序( Multiplex PCR and Nanopore Sequencing of Genes Associated with Antimicrobial Resistance in Neisseria gonorrhoeae Directly from Clinical Samples )
C Zhang L Xiu Y Li L Sun J Peng Neisseria gonorrhoeae Antimicrobial resistance Targeted sequencing Multiplex amplicon sequencing
背景淋病奈瑟菌耐药(AMR)已在全球范围内蔓延。需要快速、全面的方法来准确描述淋球菌AMR图谱。建立了一种基于多重扩增子测序的方法，直接从临床标本中同时测序13个与淋球菌AMR相关的基因。方法采用9株淋球菌进行方法的建立和验证。将11份尿道拭子及其相应培养分离物配对，以确定方法的准确性。制备不同稀释度的模拟样品，测定方法的灵敏度。用5株非淋菌奈瑟菌和24例淋球菌阴性的临床标本进行交叉反应性评价。最后，将该方法应用于64例临床样本，以评估其性能。结果以Sanger测序法为参考，扩增子测序的碱基准确度达99.5%以上，AMR位点正确识别。检测限(LOD)低于31拷贝/反应。未观察到明显的交叉反应性。从包括9个尿液在内的64份临床样本中成功地回收了目的基因，证明该方法可适用于不同类型的样本。对于临床样本，可在7h40min～10h40min的时间范围内得到结果，而对于分离株，周转时间约短2h。结论：该方法具有灵敏度高、准确度高等优点，是一种简便、通用的无培养诊断方法。
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