缺氧-复氧诱导巨噬细胞极化，导致外泌体miR-29a的释放，介导心肌细胞焦亡( Hypoxia-reoxygenation induces macrophage polarization and causes the release of exosomal miR-29a to mediate cardiomyocyte pyroptosis )

Y Wang Z Qiu J Yuan C Li B Shi

探讨低氧-复氧(HR)介导巨噬细胞向M1表型极化，进而通过外泌体释放介导心肌细胞焦脱的机制。小鼠骨髓巨噬细胞和CMs在缺氧12 h和复氧6 h条件下体外培养，建立HR细胞模型。用qPCR方法检测M1和M2巨噬细胞标志物IL-1、TNF-a、MR和Arg,建立巨噬细胞与CM共培养体系。用外泌体-CD63-红色荧光蛋白(RFP)慢病毒转染巨噬细胞，允许分泌表达RFP的外泌体，并用GW4869抑制巨噬细胞释放外泌体。qPCR检测巨噬细胞来源的外泌体中miR-29的表达，用miR-29a抑制剂转染巨噬细胞，获得低miR-29a表达的外泌体（siR-exos）。用Western印迹法和ELISA法检测热疗指标。重要的是，LPS诱导骨髓巨噬细胞向M1型极化，作为阳性对照进一步验证这些外泌体（LPS-exos）通过传递miR29a调节CM焦性。采用荧光素酶双标记法和Western blot法分析miR-29a和MCL-1的靶点关系。此外，以MCL-1过表达作为拯救实验，以确定miR-29a是否通过靶向MCL-1调节CM中的焦垂。HR作用后,巨噬细胞表达M1巨噬细胞标志物IL-1和TNF-a。CM共培养后，HR组RFP表达明显高于正常组，而GW4869组RFP表达明显低于正常组。免疫荧光显示HR组caspase-1 mRNA和蛋白表达明显高于Nor组(P<0.05)。GW4869组Caspase-1表达明显低于HR组(P<0.05)。Western blotting显示HR组热解相关的NLRP3和ASC蛋白表达水平显著高于对照组（Ctr）和Nor组（P<0.05）。而GW4869能有效抑制焦瘫相关蛋白的表达(P<0.05)。ELISA检测表明,HR组炎症指标IL-1和IL-18的表达显著高于Ctr组（P<0.05）,而GW4869组则显著低于Ctr组（P<0.05）。qPCR显示HR组与Nor组相比miR-29a表达上调。HR诱导的巨噬细胞外泌体（HR-exos）可加重HR诱导的CM热性,而外泌体中miR-29a的抑制可部分抵消CM热性的诱导。LPS-exos促进了热瘫相关蛋白的表达,与LPS-exos组IL-1和IL-18浓度升高有关。与HR-exos组和LPS-exos组相比,miR-29a抑制后,热瘫相关蛋白显著降低,IL-1和IL-18也显著降低。在HR环境中，Mcl-1过表达逆转miR-29a介导的CM焦垂。HR处理诱导巨噬细胞向M1表型极化，通过靶向Mcl-1的外体miR-29a转移介导CM焦性化。

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