策略饲喂NS0和CHO细胞培养物以控制单克隆抗体的聚糖谱和免疫原性表位( Strategic feeding of NS0 and CHO cell cultures to control glycan profiles and immunogenic epitopes of monoclonal antibodies )

C Villacrés VS Tayi M Butler

糖基化谱的控制对于可由包括CHO和NS0在内的多种细胞系产生的治疗性单克隆抗体的一致制造是必不可少的。特别值得关注的是产生非人表位的潜力，如N-糖基神经氨酸(Neu5Gc)和Gala1-3Gal可能具有免疫原性。我们观察了一种常用的培养基中添加锰、半乳糖和尿苷(MGU)对CHO和NS0细胞产生Mab的影响，以增强半乳糖基化和唾液酸化，以及这些非人聚糖表位的产生。在不添加MGU的情况下，由NS0细胞产生的人源化IgG1抗体(Hu1D10)显示出低水平的单、双歧化结构(SI:0.09)，其中75%的唾液酸为Neu5GC。由CHO细胞产生的嵌合人-骆驼单抗(EG2-hFc)显示同样低的唾液酸化水平(SI:0.12)，但唾液酸的Neu5Gc含量可忽略不计(<3%)。添加到生产培养物中的MGU补充剂的组合导致两种单抗的半乳糖基化显著增加（高达GI:Hu1D10为0.78,EG2-hFc为0.81）。但两种单克隆抗体对唾液酸解的影响不同。我们观察到MG的联合作用使EG2-hFc单抗的唾液酸解略有增加，但似乎其中一种成分（尿苷）对唾液酸解有抑制作用。另一方面，MG或MGU显著增加了Hu1D10的唾液酸解(SI:0.72)，这种增加主要归因于Neu5Ac而不是Neu5Gc的形成。用MG或MGU观察到的半乳糖基化水平的增加归因于通过增强细胞内UDP-Gal水平和作为酶辅助因子的Mn2+的可用性而激活半乳糖基转移酶。然而，这种效应不仅增加了与GlcNAc的理想的beta1-4 Gal连锁，而且不幸的是在NS0细胞中增加了gala1-3 Gal的形成，这表明在MGU补充剂的组合存在下增加了x3。添加胎牛血清(FBS)的培养基增加了游离Neu5Ac的可利用性，从而导致NS0细胞对Hu1D10的唾液酸解作用显著增加。这也导致Neu5Gc在来自mAb的测量唾液酸中的比例显著降低。

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