人MnSOD和水蛭素融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及其对95-D细胞转移和侵袭的影响( Soluble expression of a human MnSOD and Hirudin fusion protein in Escherichia coli, and its effects on metastasis and invasion of 95-D cells )

S Yi D Niu F Bai S Li L Huang W He A Prasad A Czachor LC Tan N Kolliputi

锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）是一种通过清除超氧自由基(O2-)来保护细胞免受自由基侵害的重要酶。水蛭素是一种小分子活性肽分子，是迄今为止最强的抗凝药物之一，能有效治疗血栓性疾病。在本研究中，我们将水蛭素与人MnSOD的C端进行GGGGS连接，得到一种新的双特征融合蛋白HMNSOD-水蛭素。将hMnSOD-水蛭素基因片段插入pET15b(Sma I,CIAP）载体，形成重组pET15b-hMnSOD-水蛭素质粒，然后转入大肠杆菌Rosetta-Gami株表达。用SDS-PAGE检测经IPTG诱导后的融合蛋白，预计约30kDa。此外，HMNSOD-水蛭素蛋白在上清液中以可溶性形式大量存在。经Ni-NTA亲和层析，纯化率达95%以上。HMNSOD-水蛭素蛋白产量达到每升细菌培养物67.25mg。纯化后的蛋白经Western blotting确认其同源性。HMNSOD-水蛭素蛋白活性测定表明，所获得的HMNSOD-水蛭素蛋白的抗氧化活性为2444.0±96.0U/mg,抗凝血活性为599.0±35.0ATU/mg。体外生物活性测定表明，HMNSOD-水蛭素蛋白对H9c2、HK-2和H9(human CD4+，T细胞）细胞系没有或几乎没有细胞毒性。Transwell迁移试验和侵袭试验表明，HMNSOD-水蛭素蛋白具有抑制人肺癌95-D细胞体外转移和侵袭的作用。

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