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甘精氨酸前体聚集物中Kex2位点的埋藏抑制了其在毕赤酵母中的胞内加工以及甲醇饲喂策略和诱导温度对甘精氨酸前体生产参数的影响( Buried Kex2 Sites in Glargine Precursor Aggregates Prevent Its Intracellular Processing in Pichia pastoris Mut s Strains and the Effect of Methanol-Feeding Strategy and Induction Temperature on Glargine Precursor Production Parameters )
A Caballero-Pérez JM Viader-Salvadó AL Herrera-Estala JA Fuentes-Garibay M Guerrero-Olazarán
甘精胰岛素是一种低血糖风险较小的长效胰岛素类似物。与人的胰岛素一样,甘精胰岛素是一种球状蛋白质,由两个二硫键连接的两条多肽链组成。将毕赤酵母KM71 Mut s菌株通过两个Kex2位点的切割来产生和分泌甘精胰岛素。然而,重组产物是单链甘精胰岛素(甘精胰岛素前体),而不是预期的双链甘精胰岛素。单链甘精酸的二聚体和六聚体形式的分子模型分析表明,埋藏的Kex2位点阻止了细胞内甘精酸前体的加工。研究了甲醇进料策略(甲醇限制流加和甲醇非限制流加)和诱导温度(28°C和24°C)对生物反应器培养中细胞生长和生产参数的影响。在所有培养物中均观察到以恒定比生长速率的指数生长。体积生产力和底物比消耗率与比生长速率成正比。较低的温度使酵母细胞的代谢活性增加,从而提高了比生长速率。24°C的甲醇无限制流加培养工艺参数值最高。诱导75 h后,从培养基中得到0.122 g/L甘精酸前体。
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