地衣芽胞杆菌HS10原生质电转化体系的研究

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作者：scidown 发布时间：2021-07-04 00:45:38 文章标题：

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徐龙黄文祥刘红霞地衣芽胞杆菌；原生质体；电转化；质粒

文章简述：

地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis HS10及其粗蛋白对多种病原真菌具有防治效果,为挖掘其生防功能基因,本研究通过对原生质体的制备,再生培养基,渗透压稳定剂,电击参数等试验条件进行优化,建立了地衣芽胞杆菌HS10原生质体电转化法.结果表明最佳转化条件为:转接培养10h达到对数生长后期的菌体,浓缩4倍后,利用终浓度1mg/mL的溶菌酶,于37℃,150r/min酶解20min,酶解效率达到99.34%,1×SMM洗涤3次,调整菌浓度至1.0×10^8 cfu/mL,并通过1.6kV,5ms的电击后,迅速在SMMP溶液中100r/min,37℃恢复6-10h,涂布于含Kan和Erm的再生培养基DM3平板.将该方法用于突变体库构建的质粒pMarA(8 253bp)和基因敲除质粒pMADΔCP(13 043bp)的大片段质粒转化,分别获得了37cfu/μg DNA和10cfu/μg DNA阳性转化子.该遗传转化体系为地衣芽胞杆菌HS10中相关基因功能的研究提供了技术支撑.

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