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对一种L, roline顺羟化酶顺化原底物的优化( Re﹑rogramming and optimization of a L﹑roline cisydroxylase for the cisalogenation of its native substrate )
Athena Papadopoulou Jasmin Meierhofer Fabian Meyer Takahiro Hayashi Rebecca Maria Ursula Buller
非EME铁/α-戊二酸依赖卤化酶作用于独立底物，催化灭活C(SP3)键的区域选择性和立体选择性卤化。然而，由于这些卤化酶的特征很少，酶促自由基卤化的生物合成潜力仍然有限。在此，我们描述了通过将一个单点突变(D108G)引入马利洛蒂中华根瘤菌L,ROLINE顺式羟化酶的活性位点，将该酶重塑为卤化酶。Re,rogramed卤化酶具有明显的区域选择性：L,roline的卤化反应只发生在C3,Osition,保留的羟基化活性导致了阳离子的衍生化，与野生型酶的区域选择性相当。通过多轮定向进化，确定了一个较亲本酶SmP4H(D108G)的表观k cat/k m提高98倍的氯化L,ROLINE的卤代酶变体。这种新型卤化生物催化剂的开发和优化，突出了合理利用非EME Fe/αKG依赖双加氧酶的化学多样性进行C功能化的可能性。
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