增强Hsp90和Raptor的相互作用调节T细胞激活的mTOR信号( Enhanced Interaction Between Hsp90 and Raptor Regulates mTOR Signaling upon T Cell Activation )

Greg M Delgoffe Thomas P. Kole Robert J Cotter Jonathan Powell

充分的T细胞激活需要在共刺激（信号2）的背景下进行抗原识别（信号1）。我们的研究小组和其他研究人员已经确定雷帕霉素（mTOR）的哺乳动物靶点在整合共刺激信号中起着重要作用。具体来说，缺乏mTOR激活的Th1 T细胞激活导致T细胞无能形式的耐受。mTOR是一种进化保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，在哺乳动物细胞中被证明能解释环境线索。mTOR被一系列不同的输入激活，包括胰岛素、氨基酸、生长因子和CD28。mTOR信号通过两个信号复合物:TORC1和TORC2。TORC1信号转导的一个重要组成部分是TOR（猛禽）的调节相关蛋白。理解mTOR函数的核心问题之一是确定不同的上游信号如何导致不同的下游功能后果。为了在T细胞中解决这个问题，我们进行了蛋白质组学方法来识别新的Raptor结合蛋白。Jurkat T细胞要么在无血清培养基中孵育，要么在高激活培养基中孵育。将两种裂解物进行免疫沉淀，经SDS-PAGE和银染分离。接下来，在刺激细胞和未刺激细胞的裂解物中，鉴定出与raptor有差异结合的蛋白质带。一条位于90 kDa附近的条带被切除，随后用质谱法确定为Hsp90，这是许多蛋白质“客户”正确折叠所必需的伴侣蛋白。这些发现随后在原代T细胞中得到证实。与抗CD3和抗CD28激活后，猛禽的IP导致Hsp90的共IP和Hsp90的IP导致猛禽的同时沉淀。为了进一步确定Hsp90与Raptor相互作用在T细胞中的作用，我们使用了Hsp90抑制剂17-AAG。在雷帕霉素或17-AAG存在下刺激原代T细胞。与17-AAG而不是雷帕霉素孵育导致猛禽蛋白水平下降，这与猛禽是Hsp90客户的概念一致。从功能上看，这导致了通过S6K-1磷酸化测量的TORC1活化的降低。更重要的是，尽管17-AAG在初始刺激时不抑制IL-2的产生，但在17-AAG存在下用抗CD3和抗CD28刺激的原代T细胞在5天后再刺激时不能产生IL-2；他们过敏。总之，我们的发现证明了在T细胞中Hsp90和raptor之间一种新的激活诱导的相互作用。这种相互作用可以调节TCR诱导的激活和耐受之间的决定。Hsp90抑制剂目前被评价为抗肿瘤药物，虽然这些药物不会急性抑制T细胞功能，但它们可能会诱导活化的Th1细胞的无能。因此，Hsp90抑制剂可能被纳入新的免疫抑制方案，通过促进T细胞耐受来治疗和预防GVHD和移植排斥反应。

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