实时荧光定量PCR检测杨树真菌病生防菌N6-34的定殖特性及对病原真菌的抑制作用( Colonization Characteristics of Poplar Fungal Disease Biocontrol Bacteria N6-34 and the Inhibitory Effect on Pathogenic Fungi by Real-Time Fluorescence Quantitative PCR Detection )

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杨树溃疡病是引起杨树溃疡病的重要病害之一。本研究从杨树组织中筛选出枯草芽孢杆菌N6-34是一株拮抗枯草芽孢杆菌的菌株。为了解枯草芽孢杆菌N6-34在杨树植株中的定殖规律，采用绿色荧光蛋白(GFP)标记的枯草芽孢杆菌N6-34在杨树植株和根际土壤中的定殖情况进行了研究。为证实菌株N6-34对病原真菌的抑制作用，以尖孢镰刀菌为目标菌株进行了实时荧光定量PCR实验。首先成功地将含有gfp基因的质粒(pHT01-P43GFPmut3a)转化到野生枯草杆菌N6-34，该质粒在细胞生长和抗真菌活性方面与菌株N6-34具有相似的特性。通过杨树盆栽试验，研究了杨树在植株和根际土壤中的定殖规律和定殖量。共聚焦激光扫描显微镜观察表明，GFP标记的枯草芽孢杆菌N6-34(N6-34-GFP)能在初生根、侧根和不定根中定植。随着接种时间的延长，N6-34-GFP在根际土壤和杨树植株中的定殖量呈先增加后稳定一段时间后下降的趋势。实时荧光定量PCR结果表明，随着接种时间的延长，尖孢霉的数量逐渐减少。因此，N6-34-GFP在杨树根际土壤和植株不同部位均有定殖。此外，菌株N6-34对病原真菌的生长有抑制作用。枯草芽孢杆菌N6-34在根际土壤和杨树植株中的定殖能力和体外抑制真菌生长的能力表明该菌株具有作为生物防治剂的潜在应用前景。

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