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细胞骨架和神经元突触蛋白的多路共聚焦和超分辨率荧光成像( Multiplexed confocal and super-resolution fluorescence imaging of cytoskeletal and neuronal synapse proteins )
Syuan-Ming Guo R Veneziano S Gordonov L Li M Bathe
神经元突触包含数十种蛋白质，它们的表达水平和定位是突触传递和可塑性的关键决定因素。常规显微镜中使用的荧光团的光谱特性限制了给定样品中被测蛋白质的数量为四种。同时对许多蛋白质进行高通量共聚焦或超分辨率成像而不受光谱限制所施加的靶数限制的能力将使突触蛋白质网络的原位大规模表征成为可能。在这里，我们介绍PRISM：基于探针的序列复用成像，一种连续利用高亲和力锁定核酸(LNA)或低亲和力DNA探针来实现衍射受限共焦和基于油漆的超分辨率成像的方法。与使用低亲和力探针实现定位超分辨成像相比，高亲和力LNA探针提供了高通量、基于共焦的成像。在成像前对所有靶点进行同时免疫染色，然后在温和的洗涤条件下进行顺序的LNA/DNA探针交换，只需几分钟。我们应用棱镜来量化单个神经元突触中十几种细胞骨架和突触蛋白的共表达水平和纳米尺度的组织。我们的方法可扩展到几十种目标蛋白，并与常用的高含量筛选平台兼容，这些平台用于询问各种细胞类型中与遗传和药物扰动相关的表型变化。
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