枯草芽孢杆菌基因组无标记高效精确构建

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作者：scidown 发布时间：2021-06-24 23:01:28 文章标题：

枯草芽孢杆菌基因组无标记高效精确构建( Efficient and Precise Construction of Markerless Manipulations in the Bacillus subtilis Genome )

文章作者：

H Yu Y Xin W Shen Y Shen S Li Bacillus subtilis mazE high-fidelity fusion PCR markless genome manipulation

文章简述：

我们开发了一种高效、精确的枯草芽孢杆菌基因组操作方法，允许快速改变一个基因序列或多个基因序列，而不以任何其他方式改变染色体。本研究将大肠杆菌毒素基因mazF作为反选择标记，置于木糖诱导表达系统的控制下，与抗生素抗性基因相关联，产生“mazF-cassette”,通过同源重组将mazF-cassette上的两个同源区组成的聚合酶链反应(PCR)片段整合到目标位点的染色体上，对抗生素抗性进行正选择。然后，在PCR产物设计中，采用迷宫反选择的方法，通过两个短的直接重复序列之间的单交叉来实现mazF-cassette从染色体上的切除。在相同背景下，这种方法高效准确地传递点突变，灭活一个特异性基因，删除一个大的基因组区域，并以极小的极性效应产生框架内的缺失。

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