8-苯胺萘磺酸与牛心脏二磷酸吡啶核苷酸连接的异柠檬酸脱氢酶的特异性结合( Specific binding of 8-anilinonaphthalene sulfonate to diphosphopyridine nucleotide-linked isocitrate dehydrogenase from bovine heart )

CC Fan LA Tomcho GWE Plaut

牛心DPN连接的异柠檬酸脱氢酶使2-甲苯胺萘-6-磺酸酯和8-苯胺萘磺酸酯(ANS)的荧光强度增加,发射峰蓝移；7-（-甲氧基苄基氨基）-4-硝基苯-2-氧杂-1,3-二唑、金胺O、丹酰基（-二甲基-5-萘胺-1-磺酸盐）-Cys、丹酰基-Gly或丹酰基-Trp均未观察到这种作用。在激发波长为280 nm处,ANS荧光强度增加10倍,最大发射波长由游离ANS的515 nm移至结合ANS的465 nm,同时在317 nm处蛋白质发射减少,显示了染料与酶的结合和能量转移。荧光滴定（激发和发射波长分别为374和465 nm）揭示了ANS结合位点的数目（）为每酶亚单位一个（42,000道尔顿）。异柠檬酸锰降低ANS与酶的结合；在饱和底物存在下，ANS-酶复合物（）的解离常数由16微升至76微升。这表明异柠檬酸锰诱导了酶的构象变化。单用Mn、DPN、DPNH、ADP对or无影响；然而，DPNH和ADP在异柠檬酸锰存在下使ANS结合降低到=0.21～0.38，表明底物增加了核苷酸的结合。ANS抑制酶活性。动力学实验得出,当DPN变化,异柠檬酸锰不变时,ANS-酶复合物的解离常数为=154µ.当DPN变化,异柠檬酸锰不变时,ANS-酶复合物的解离常数为=154µ.与之相比，存在DPN且不存在异柠檬酸锰时，=16µ.不同浓度的异柠檬酸锰对ANS的抑制常数(70µ)与饱和异柠檬酸锰荧光滴定实验测定的ANS-酶复合物的解离常数(76µ)一致。用多种方法估算了异柠檬酸锰-酶复合物的离解常数。通过荧光猝灭测定，异柠檬酸锰ANS的位移为78µ，而异柠檬酸锰的位移为90µ，离解常数为69µ，这是从对5 -磷酸吡哆醛抑制的底物保护实验中获得的(F，C.C.，P，G.W.E.(1974)13，52-59)。

SciDown文献求助系统（解决99%问题） Public Download Elsevier 万方医学 NCBI JBC ResearchGate EBSCO mendeley.com JBC