抗NMDAR脑炎小鼠血脑屏障破坏的实验性研究

劳大媛 龚卓伟 李泰燕 黄文 抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎 紧密连接 血脑屏障 基质金属蛋白酶9

目的:探讨抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)NR1亚基氨基末端结构域主动免疫诱导NMDAR脑炎对小鼠紧密连接(TJ)跨膜蛋白Occludin,带状闭合蛋白1(ZO-1)和血脑屏障(BBB)完整性的破坏作用.方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组,每组10只.模型组用NMDAR NR1受体区域的N356/G385氨基酸肽段主动免疫C57BL/6小鼠,建立抗NMDAR脑炎小鼠模型,对照组注射不含肽段的等体积乳剂混合物,主动免疫6周.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清抗NMDAR IgG抗体,水迷宫和旷场实验评估小鼠记忆和焦虑行为,荧光素钠法测定BBB通透性,实时荧光定量PCR(RTqPCR)法检测大脑皮质NMDAR NR1,Occludin,ZO-1 mRNA表达,western blotting法检测大脑皮质NMDAR NR1,基质金属蛋白酶9(MMP9),Occludin,ZO-1和神经元特异性核蛋白(NeuN)蛋白表达.结果:与对照组比较,模型组小鼠血清中抗NMDAR IgG抗体为阳性,并出现明显的记忆障碍和焦虑行为(均P<0.05).模型组小鼠脑荧光素钠渗漏量明显增加(P<0.001),大脑皮质NMDAR NR1,Occludin和ZO-1 mRNA及蛋白表达量降低,MMP9蛋白表达量升高,NeuN蛋白表达量降低(均P<0.05).结论:利用NMDAR NR1356-385肽段主动免疫成功建立了抗NMDAR脑炎小鼠模型,产生抗NMDAR抗体,表达增加的MMP9可能破坏TJ蛋白从而使BBB功能障碍,导致大脑神经元损伤,并出现精神行为学改变.

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