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可视化体外贩运( Visualizing In Vitro Trafficking )
JW Murray Microtubules Actin In vitro trafficking Cellular organelles Time lapse imaging Endosomes
在这里,我们提供了一个关于执行体外贩运分析的详细指南。这是一种高分辨率的光学显微镜分析,旨在观察细胞骨架丝基的细胞器贩运。该策略是从裂解的哺乳动物细胞中部分纯化细胞器,并将其冷冻为一次性使用的等分品。然后解冻细胞器,使其与微管和肌动蛋白丝结合,这些微管和肌动蛋白丝被涂在手工制作的光学微室上。然后进行时移多通道荧光显微镜来识别特定的囊泡和相关蛋白,并观察和定量物质是如何运输的。这些方法最初是用来研究啮齿类动物的肝内体的,但在这里适用于培养细胞的研究,并包括对它们与其他类型细胞器的使用的评论。
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