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食品级蛋白质生产的先进策略:一种新的大肠杆菌/乳酸菌穿梭载体用于改进克隆和食品级表达。( Advanced Strategies for Food-Grade Protein Production: A New E. coli/Lactic Acid Bacteria Shuttle Vector for Improved Cloning and Food-Grade Expression. )
Marcello Tagliavia Aldo Nicosia advanced food-grade cloning: flippase (FLP) recombinase food-grade expression vectors generally recognized as safe (GRAS) microorganisms lactic acid bacteria (LAB) resistance cassette removal shuttle expression vectors
在革兰氏阳性菌中，特别是在LAB（即乳球菌、乳杆菌和链球菌）中进行食品级重组蛋白的生产，在重组酶的生产、工业食品发酵、基因和代谢工程以及用于口服疫苗接种的抗原递送等领域具有很大的兴趣。食品级表达依赖于通常被认为是安全生物的宿主和不依赖于抗生素标记的克隆选择，这限制了整个DNA操作工作流程，因为它只能在表达宿主中而不是在大肠杆菌中进行。而且，许多商业表达载体缺乏用于蛋白质纯化的有用元件。我们构建了一个含有可移除的选择性标记的“穿梭”载体，该载体允许在大肠杆菌中可行的克隆步骤和随后在实验室中的蛋白表达。事实上，盒可以很容易地从所选择的重组质粒上切除，并将得到的无标记载体转化为最终的实验室宿主。进一步介绍了改进的MCS、6XHis-Tag和凝血酶裂解位点序列等有用的元件。所得到的载体在大肠杆菌中易于克隆，在食品级表达载体中可以快速转化，并且含有用于改进重组蛋白纯化的附加元件。总体而言，这些特性使新载体成为食品级表达的改进工具。
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scidown PeerJ。2014年2月13日,2:e259。doi: 10.7717 / peerj.259。eCollection 2014。下载