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双探针微荧光法测定短期激素作用下单个肝细胞的跨膜电位(ΔΨ p( Two-Probe Microfluorometry Estimation of Transmembrane Potential (ΔΨ p) Slight Changes in Individual Hepatocytes Under Short-Term Hormone Action )
N. S. Kavok M. Y. Malyukina I. A. Borovoy E. Transmembrane potential changes Microfluorometry Single hepatocytes Hormone effect Probes
本文用定量图像显微荧光法和显微荧光光谱法研究了肾上腺素(10−6M)和苯肾上腺素(10−5M)激活大鼠单个肝细胞的早期事件。阳离子DIOC2和阴离子SQSC4探针已用于实时研究中的图像分析和跨膜电位(P)估计。记录了单细胞内染料积累产生的荧光光谱。根据平均荧光强度,用适用于亲脂性阳离子探针的Nernst方程计算了荧光强度的大小。DIOC2揭示了两种激素均可引起肝细胞膜的双相超极化,而激动剂苯肾上腺素可引起较高幅度的P变化。第2和第5分钟内的第1次P升高(±8.6±4.2mV)明显与Ca+/K2+-ATP酶被Ca2+动员激素激活有关。第2个超极化峰(p=-13.2±3.2mV)是在15分钟内短暂降低p(p=10.9±4.3mV)后,在25～30分钟出现的,可能是由苯肾上腺素对K+-通道的刺激作用所介导的。“A-plus-plus”>p=-13.2±3.2mV“的超极化峰。”A-plus-plus“>p=-13.2±3.2mV”可能是由苯肾上腺素对K+-通道的作用所致。K+通道阻断剂(BA2+或4-氨基吡啶）以及细胞外K+的升高阻止了超极化。0.4%丁醇对PLD依赖的信号转导通路的调节对第一阶段的超极化效应影响较小,但对第二阶段的超极化效应有抑制作用。这表明PLD参与了由K+-通道介导的对苯肾上腺素的反应性的？？P波动。基于SQSC4的荧光参数估计表明,在超极化的两个相位下,荧光参数的相对变化具有类似的时间依赖性。由反向带电探针测定的P的同步涨落表明,定量显微荧光法可以在短期激素作用下单独评估非兴奋性单个细胞的P和M的轻微变化。
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