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异养硝化菌不动杆菌Y16低温羟胺氧化酶的纯化与鉴定( Purification and characterization of a low-temperature hydroxylamine oxidase from heterotrophic nitrifier Acinetobacter sp. Y16 )
SM Zhang LI Wei Guang DY Zhang XF Huang W Qin CQ Sha 异养硝化细菌 胺氧化酶 层析纯化 不动杆菌 低温 SDS-PAGE 凝胶过滤层析 RP-HPLC
目的从异养硝化细菌不动杆菌Y16中分离纯化低温羟胺氧化酶(HAO)并考察其酶学性质。方法采用阴离子交换和凝胶过滤层析法从Y16菌株中分离纯化HAO,用反相高效液相色谱和SDS-PAGE测定HAO的纯度和分子量,以羟胺为底物,铁氰化钾为电子受体,用铁氰化钾还原法测定HAO的活性,用质谱法测定HAO的部分氨基酸序列。结果通过阴离子交换和凝胶过滤法从Y16菌株中纯化出分子量为61 kDa的低温HAO色谱分析表明,该酶在4~40℃范围内,以羟胺为底物,铁氰化钠为电子受体,在4~15℃,pH6.0~8.5范围内稳定,活性变化不超过30%,最适温度为15℃,pH7.5。质谱鉴定了3种与其它报道的HAOs不同的肽。结论本研究首次从异养硝化不动杆菌中分离出一种低温HAO,与其它报道的HAOs在分子上存在差异研究结果表明,菌株Y16通过低温HAO催化羟胺氧化脱铵。
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