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利用CLIP测序技术对丙型肝炎病毒分离株进行基因分型( Genotyping of Hepatitis C Virus Isolates using CLIP Sequencing )
RS Ross SO Viazov CD Holtzer A Beyou M Roggendorf molecular beacons oligonucleotides fluorophore PCR spectrofluorometry multiplexing
丙型肝炎病毒(HCV)基因型和亚型的确定对HCV感染的临床处理和预后越来越重要。本研究的目的是评价一种新开发的、市售的HCV基因分型试剂盒(TRUGENE HCV5 NC基因分型试剂盒)的特异性和可靠性。该技术利用先前由诊断性罗氏扩增HCV试验产生的PCR片段,随后进行同时PCR扩增和5 非编码区(5 NCR)的直接测序(片段测序)。采用TRUGENE HCV5 NC基因分型试剂盒和DNA酶免疫分析(DEIA)对100例患者的HCV分离株进行基因型分析。两种方法的分型结果在91%的病例中完全一致。用HCV核心区和NS5B区引物扩增两种基因型分配不一致的样本的HCV RNA。系统发育分析证实了6例DEIA和2例CLIP测序的结果。在前6例中,由于5 NCR高度保守,TRUGENE HCV5 NC基因分型试剂盒不能正确区分基因型1和2亚型。但由于HCV基因型1与非基因型之间没有任何误分,因此该系统所得结果总体上是可靠的,可用于临床实践。我们手中的TRUGENE HCV5 NC基因分型试剂盒被证明是一种快速和方便的技术,可能是一种有吸引力的选择,在实验室中已经使用罗氏扩增器HCV诊断逆转录-PCR检测HCV基因分型。
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