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超灵敏CRISPR/Cas12a电化学生物传感器用于检测单核增生李斯特菌( An ultrasensitive CRISPR/Cas12a based electrochemical biosensor for Listeria monocytogenes detection )
F Li Q Ye M Chen B Zhou Q Wu
单核细胞增生李斯特菌是一种重要的食源性致病菌，可引起李斯特菌病，患者死亡率高。因此，开发一个高特异性、高灵敏度、高实用性的单核细胞增生L.检测平台是非常必要的。CRISPR/Cas系统由于Cas效应蛋白的反式裂解能力，在下一代核酸检测生物传感器的开发中显示出巨大的潜力。本文将CRISPR/Cas12A的反式裂解活性引入电化学生物传感器（E-CRISPR）,结合重组酶辅助扩增(RAA),建立了一种高效、特异、超灵敏的检测方法；即基于RAA的E-CRISPR。这种方法背后的概念是，目标将诱导表面信号探针（包含电化学标签）的构象变化，从而导致电化学标签的电子转移速率的变化。在E-CRISPR传感器中引入了一个基于RAA的Cas12a系统，实现了目标存在和不存在之间更显著的信号变化。在优化的条件下，基于RAA的E-CRISPR可检测到低至0.68aM的基因组DNA和26 CFU/ml的单核细胞增生L.更重要的是，基于RAA的E-CRISPR能够快速和超灵敏地检测刺激性和天然金针菇样品中的单核细胞增生L.而且未观察到与其他非靶细菌的交叉反应。该系统是一个简单、高灵敏度、高准确度的单核细胞增生L.
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