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基于DNA纳米结构修饰固态纳米孔的酶促反应检测系统( Detection System of Enzymatic Reaction Based on DNA Nanostructure Modified Solid-State Nanopore )
Zhu Libo Ali Irshad Wen Tian Xu Ying Cai Lingfeng DNA TETRAHEDRON ENZYMATIC REACTION HRP SOLID-STATE NANOPORE
利用纳米孔在单分子水平上检测和分析酶促反应，以其无标记、低样品消耗和长时间观察等独特的优点而备受关注。一般来说，纳米孔检测酶反应的适用性主要依赖于固态纳米孔的修饰。本文报道了一种用于实时监测辣根过氧化物酶(HRP)酶反应的新型固态纳米孔传感器。该传感平台基于单个氮化硅(Si3N4)纳米孔，裸孔径为40nm。采用碳二亚胺偶联化学方法在纳米孔内表面修饰DNA探针。初步合成了携带单个HRP酶的DNA四面体，并与修饰的DNA探针杂交。当反应底物ESH2O2和ABTS加入到这种修饰的固态纳米孔通道中时，固定化的HRP酶有能力在单个纳米孔内诱导酶反应。反应产物ABTS+分子在孔内施加电压后通过固态纳米孔，从而引起跨孔离子电流的变化。根据离子电流的变化，可以实时监测HRP酶促反应。此外，对易位事件的独特特征进行了观察和研究，为今后单分子水平的酶特异性检测方案提供了强有力的框架。对纳米孔通道受限空间内固定化单分子酶动力学的研究也有一定的促进作用。
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