内蒙古马铃薯致黑腿乳杆菌首次报道( First Report of Pectobacterium parmentieri Causing Blackleg on Potato in Inner Mongolia, China )

Y Cao Q Sun Z Feng U Handique R Zhang

马铃薯（Solanum tuberosum）黑腿病是由果肉杆菌（Pectobacterium spp.）引起的。和Dickeya spp.（Charkowski,2018）世界范围内。2018年和2019年的6月至8月，中国内蒙古呼伦贝尔、乌兰察布和呼和浩特市马铃薯产区均发生黑腿病。调查的土地总面积约为200公顷。植株表现出典型的黑腿症状，如茎部发黑发育不良或叶片卷曲（图S1)，并统计了感染植株的数量。该病的发病率约为8%。从每公顷约75,000株马铃薯（主要变种为Favorita和Xisen）的10公顷马铃薯田中采集了5株病株。使用无菌手术刀从选定的植物中取出两厘米长的有症状的茎样本。样品表面用75%乙醇消毒2 min。然后用无菌蒸馏水冲洗，再用5毫升无菌蒸馏水浸泡30分钟。将该溶液的三种10倍稀释度的等分物镀到结晶紫果胶酸琼脂(CVP)平板上,并在28°C下孵育3天（Ge等人,2018年）。用牙签挑取在CVP平板上显示有点的单个细菌菌落（图S2)，在营养琼脂上划线（She等人，2013年）以获得纯菌落。使用通用引物集27F/1492R在纯菌落上进行含有16S rRNA基因的1.4kb片段的扩增（Monciardini et al.，2002)。扩增子测序后提交GenBank核苷酸基础局部比对搜索工具分析。4株分离物（GenBank登录号:MN626412、MN626449、MN625916和MT235556)的16S rRNA基因序列与帕氏胸杆菌型菌株RNS08-42-1A(NR_153752.1)的序列同源性均在99%以上（图S3)。对这四个分离株的6个看家基因proA(MT427753-MT427756)、gyrA(MT427757-MT427760)、icdA(MT427761-MT427764)、mdh(MT427765-MT427768)、gapA(MT427769-MT427772)和rpoS(MT427773-MT427776)进行了扩增和测序（Ma等人，2007年，Waleron等人，2008年）。所有序列与帕氏胸杆菌菌株的序列同源性为99%～100%。使用MEGA 6.0软件通过多位点序列分析(MLSA)构建了系统发育树（图S4)（Tamura等人，2013年）。通过将100微升细菌悬浮液（10 CFU/ml）或无菌磷酸盐缓冲液注入茎基部上方2厘米处,对样品进行测试,以符合对马铃薯幼苗（Cv.Favorita）的科赫假设（Ge等人,2018年）。幼苗在21°C和80%湿度下孵育（She等人，2013年）。接种后3至5天，只有感染的幼苗表现出与田间观察到的相似的症状：感染区变黑腐烂（图S5)。用上述相同的方法鉴定从这些有症状的幼苗中分离的细菌菌落，并鉴定为接种的帕氏胸杆菌菌株。马铃薯黑腿病是由嗜酸果壳杆菌、胡萝卜果壳杆菌亚种（Pectobacterium arotovorum subsp.）和嗜酸果壳杆菌（Pectobacterium arotovorum subsp.）引起的。carotovorum和Pectobacterium carotovorum亚种。brasiliense in China（Zhao et al.,2018）。据我们所知，这是内蒙古地区首次报道由帕氏胸杆菌引起的马铃薯黑腿病。我们认为，这份报告将提请注意对这种病原体的鉴定，这对疾病管理至关重要。

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