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用Zip重组酶聚合酶扩增法高灵敏度检测细针抽吸样品中BRAF V600E低丰度突变( Highly Sensitive Detection of Low-Abundance BRAF V600E Mutation in Fine-Needle Aspiration Samples by Zip Recombinase Polymerase Amplification )
L Zhang J Peng J Chen L Xu W Cheng
甲状腺乳头状癌(PTC)是内分泌肿瘤中最常见、发病率较高的甲状腺癌，其准确诊断的意义尤为突出。然而，常用的细胞学方法（细针抽吸细胞学）和分子诊断方法（如PCR和测序）在诊断时间、灵敏度和用户友好性方面受到限制。在本研究中，我们介绍了一种新的Zip重组酶聚合酶扩增（Z-RPA）策略来有效检测PTC细针穿刺标本中的罕见突变等位基因，该策略具有灵敏、快速、操作简单等优点。用Zip核酸(ZNA)探针夹住突变区,pHI29聚合酶可选择性地置换不匹配的ZNA探针并启动扩增,而不接触互补的ZNA探针并根据基因型阻断扩增。通过优化的条件和设计,证明该方法具有良好的敏感性和特异性,能够在40分钟内检测到4 ng基因组DNA中的BRAF V600E突变(≈1个拷贝）。在临床样本分析中的鲁棒行为也得到了证明。Z-RPA策略为临床细针穿刺标本中快速、灵敏、简便地检测BRAF V600E突变提供了一种实用的方法,为癌症的早期诊断和治疗提供了一种有前途的方法。
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